一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白的方法

专利概览

申请人

云南省烟草农业科学研究院

发明人

李文正;陈禹保;刘勇;陈学军;卢秀萍;唐启慧

申请号

CN201010110901.8

主分类号

C12N15/70

IPC

C12N15/70;C12N15/29;C12N1/21;C07K14/415

摘要

本发明公开了一种利用大肠杆菌表达烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白(GRP)的方法，包括表达菌株筛选、培养基优化、蛋白提取缓冲液配制，其特征在于：具体包括下列工序：A、提取烟草总RNA，逆转录成cDNA，PCR扩增出GRP蛋白基因；B、构建重组表达质粒pGEX4T-1-GRP；C、转化大肠杆菌表达菌株、小量诱导筛选高效表达菌株、大量诱导表达；D、蛋白提取和E、蛋白活性鉴定。本发明通过筛选大肠杆菌高效表达菌株，优化培养基，克隆基因构建出GRP基因重组表达质粒pGEX4T-1-GRP，再用阳性质粒对菌种为rosetta的大肠杆菌菌株进行转化，并采用优化的专用培养基LinA培养、缓冲液TKM，筛选出了高效表达菌株，从而提高了烟草中富含甘氨酸RNA结合蛋白的表达效率。本发明具有成本低、操作简单、生产周期短、适于大规模生产、蛋白表达率高、活性强，易于纯化、不易降解的优点。

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