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本发明公开了一种马铃薯脱毒繁育工艺,具体涉及农业生物技术领域,该工艺包括:外植体预处理:将马铃薯茎尖分生组织置于含0.5‑1.0mg/L水杨酸的预处理液中,4‑6℃黑暗条件下浸泡;一体化脱毒培养:接种于复配氯吡苯脲、6‑苄氨基嘌呤、萘乙酸、褪黑素、硝酸银的MS一体化脱毒培养基中培养获得试管苗;病毒检测:采用多重RT‑PCR检测五种马铃薯主要病毒,筛选全阴性种苗;快繁扩增:切段继代培养,单代增殖系数达6‑8倍;雾培诱导微型薯。本发明脱毒率不低于95%,繁育效率高、周期短,适用于多个马铃薯品种的规模化脱毒种苗生产。